小核酸藥藥效評價

一、小核酸藥簡介

小核酸藥物是由十幾至幾十個核苷酸串聯組成的短核酸鏈，通過調控基因表達來治療或控制疾病的一類核酸聚合物。其通過堿基互補配對的方式與靶基因結合，特異性調控、沉默致病基因表達或糾正基因點突變，進而起到治療疾病的目的。

小核酸藥主要包括反義寡核苷酸（antisense oligonucleotide， ASO）、小干擾 RNA（small interfer-ing RNA， siRNA）、微小 RNA（microRNA， miRNA）、 核酸適配體（aptamer）等。理論上，任何基因片段都可以在體外合成對應的小核酸分子，因此小核酸藥可突破傳統小分子、抗體藥物發現的瓶頸，攻克尚無藥物的疾病。小核酸藥物具有候選靶點豐富、特異性強、藥效持久、不易產生耐藥性、藥物毒性小、藥物不良反應小、設計合成工藝相對簡單、藥物研發周期短、生產相對快速、臨床開發成功率高、轉化醫學基礎深厚、應用領域廣等諸多優點。目前小核酸藥物臨床應用較為廣泛，如罕見病、慢性病和腫瘤等。目前，基于ASGPR-GalNAc肝靶向遞送系統的藥物開發是肝臟藥物研究的新的方向。英克司蘭（Inclisiran），是首個用于控制LDL-C水平的小干擾核酸（siRNA）藥物，于2020年12月在歐盟獲批，用于治療成人高膽固醇血癥及混合性血脂異常，并于2021年12月獲得美國食品藥品監督管理局（FDA）批準上市。

二、模型簡介

1、2D原代肝細胞

原代肝細胞培養作為一種理想的體外肝臟模型，是體外藥物毒物實驗的“金標準”。通過將原代肝細胞接種在一層固相的細胞外基質上—膠原進行單層培養，可以保留大多數肝特異性的功能。優勢：原代肝細胞直接從人或動物肝臟分離，細胞中的酶量和輔助因子的水平均為正常的生理濃度，可在接近生理狀態的情況下研究藥物代謝及毒性；原代肝細胞培養較好地維持了肝細胞完整的形態和肝細胞體外代謝活性，可真實反應小核酸藥物的攝取、轉運、代謝情況。目前立沃共有14種的2D原代肝細胞模型，涵蓋了市場上大多數物種的原代肝細胞，包括：人、猴、犬、豬、兔、大鼠、小鼠、牛、羊、驢、雞、鴨、鵝、魚等物種。

2、2D肝非實質細胞

肝非實質細胞是指不具有肝臟特有功能的細胞，這些細胞的功能主要是具有連接和支撐肝實質細胞的作用。LSEC（肝竇內皮細胞） 具有獨特的表型，可促進肝實質細胞對血液中營養物質的接觸與吸收。KCs （Kupffer細胞） 是流動性極高的肝巨噬細胞，是先天性免疫反應的一個重要組成部分，它在血紅蛋白的降解、宿主防御、免疫耐受和肝臟在受到毒性損傷后的再生都起到了很重要的作用。此外，KCs 也參與到了一些比較常見的肝臟疾病的發病機制中，如酒精性和非酒精性肝損傷、肝臟纖維化等。在進行化合物肝毒性評價時，KCs 產生的促炎細胞因子如 TNF-α 和 IL-6 是保護肝毒性損傷的重要因素。HSC （肝星形細胞）胞質內富含脂滴，是維生素 A 的主要儲存場所。當肝損傷發生后，HSC 被激活，細胞外基質 ECM 合成提高，并伴隨增殖 增加，細胞遷移和黏附增強，收縮性、炎癥和趨化性等特征的改變，是形成肝臟纖維化的主要細胞類型。

3、3D圓球體（mini-liver）

3D圓球體（Mini-liver）：通過將原代肝細胞與肝非實質細胞按一定比例混合，接種于超低吸附培養板，通過自組裝的方式在24h內形成圓球體，實現圓球體的超長時間培養。

優勢：Mini-liver是具有更好地模擬與細胞生長和細胞信號轉導高度相關的細胞外微環境的能力，更接近人或動物的機體條件; 培養方式簡單并可實現多種細胞共培養;形成的球體穩定，重復性好; 可以長期培養，且能夠保持較高的白蛋白分泌水平和肝藥酶活性；可以實現高通量和高含量的藥物篩查以及藥物肝毒性的篩選，對于小核酸藥物的自由攝取、轉運、代謝更為敏感。

二、服務資質、條件與團隊

本公司按照GMP標準建設生物安全二級實驗室，并完成衛健委備案，病原體范圍：乙肝病毒、慢病毒等工具病毒、人體或動物樣本。生物安全二級實驗室配套檢測設備、設施價值2000余萬元，包括激光共聚焦、分選流式細胞儀、超高速離心機、實時熒光定量PCR儀等。技術團隊包括美國醫學與生物工程院院士、青年千人計劃、深圳市高層次人才等；其中，周明博士，博士畢業于中科院武漢病毒研究所，從事肝臟研究14年，獲得國家自然科學基金、博士后基金、廣東省科技廳、深圳市科創委等項目資助7項。

三、服務流程

          四、服務案例

案例1、Inclisiran對PSCK9表達影響

案例2、檢測某陽性藥物對某基因的敲低效果

案例3、檢測某陽性藥物對某基因的敲低效果