I 簡介

基質(zhì)膠是一種來源于健康豬細胞外基質(zhì)，經(jīng)過洗脫、粉碎、消化等步驟制成的透明膠體。豬在遺傳距離上相比嚙齒類，與人更接近，且豬來源的材料在臨床移植、醫(yī)藥、醫(yī)美、藥輔材料上有大量的應用例子，Pubmed上目前已有上百篇文獻發(fā)表，說明豬來源的基質(zhì)膠具有天然的可替代性與臨床轉(zhuǎn)化潛力。本品主要成分是層粘連蛋白、IV型膠原蛋白、巢蛋白和硫酸乙酰肝素蛋白多糖等成分[1，2]，不同組織或者器官來源的基質(zhì)膠在成分上存在較大差異。本產(chǎn)品具有低內(nèi)毒素、低DNA含量的優(yōu)勢，主要用于細胞生長和分化、細胞黏附、類器官擴增、類器官成熟分化和體內(nèi)成瘤實驗[2]等。

文章引用

Pig-derived ECM-SIS provides a novel matrix gel for tumor modeling. IF 1.6 Q3 RADIOLOGY, NUCLEAR MEDICINE & MEDICAL IMAGING Biomedical Physics & Engineering Express Pub Date : 2024-09-04 DOI:10.1088/2057-1976/ad72fa Yanhua Wu, Hao Wang, Changbo Qu, Xuesong Deng, Na Li, Sile Yue, Wenjing Xu, Yinghua Chen, Ming Zhou

II  試劑與材料

? 無血清培養(yǎng)基

? 渦旋振蕩器

? 冷凍離心機

? 預冷離心管

? TC處理培養(yǎng)板（更利于基質(zhì)膠貼附）

? 移液管

? 預冷槍頭

? 移液槍

? 生物安全柜

? 37^oC/5% CO₂培養(yǎng)箱

III 使用方法

2 注意：

為確保實驗人員安全及生物安全，請在接觸本產(chǎn)品及其廢棄物時佩戴防護口罩、乳膠手套以及防護眼罩（復蘇時）等必要的防護用品，嚴格按照本說明書操作，實驗結(jié)束后所產(chǎn)生的廢棄物按照國家、省、市級相關(guān)法律法規(guī)，進行無害化處理，確保生物安全。

2 解凍：

將本產(chǎn)品（基質(zhì)膠）小瓶從-20℃冰箱轉(zhuǎn)移到冰水混合物內(nèi)解凍30-120min或 4℃ 冰箱過夜解凍（蛋白濃度高時可能需要更多時間），待液化后用渦旋振蕩小瓶以確保基質(zhì)膠分散均勻。如一次用不完，可冰上分裝一次，分裝后建議反復凍融不超過3次。如基質(zhì)膠有較多氣泡，可300g ,4℃離心15s，以去除氣泡。將基質(zhì)膠放置在無菌區(qū)域，冰上待用（保證基質(zhì)膠溫度不超過8℃）。

2 成膠：

1、薄層凝膠法（膠厚度0.5 mm，低生長因子，8-10mg/ml）

1）使用預冷的槍頭或移液管，輕柔的吸取基質(zhì)膠混合至均勻（當基質(zhì)膠堵塞槍頭或移液管時請更換槍頭或移液管）；如基質(zhì)膠有較多氣泡，可300g ,4℃離心15s加以去除；

2）將培養(yǎng)板放置冰上，按100 μl基質(zhì)膠/cm²的用量，向培養(yǎng)板中添加基質(zhì)膠，將培養(yǎng)板在冰上輕柔振蕩，確保膠體均勻涂布于培養(yǎng)孔底部；

3）將培養(yǎng)板置于37℃培養(yǎng)箱孵育30-60min，使基質(zhì)膠完全成膠；

4）請確保移液器的吸頭不要刮擦膠；用無血清培養(yǎng)基輕輕地對培養(yǎng)孔進行清洗，促進膠面水化，并去除未凝固結(jié)合的基質(zhì)蛋白；此時培養(yǎng)板即可使用。

2、薄層包被法（培養(yǎng)板或者Transwell小室，低生長因子，8-10mg/ml）

1）使用預冷的槍頭或移液管，輕柔的吸取基質(zhì)膠混合至均勻（當基質(zhì)膠堵塞槍頭或移液管時請更換槍頭或移液管）；如基質(zhì)膠有較多氣泡，可300g ，4℃離心15s加以去除；

2）根據(jù)每批次基質(zhì)膠質(zhì)檢報告中基質(zhì)膠濃度，用預冷的無血清培養(yǎng)基將基質(zhì)膠稀釋至50μg/ml，按照培養(yǎng)孔的培養(yǎng)基用量等量進行包被（例如24孔板使用量為500μl），置于37℃培養(yǎng)箱中包被30min；

3）包被好的培養(yǎng)板或者Transwell小室，使用前利用無血清培養(yǎng)基于37℃培養(yǎng)箱中水化處理30min，然后進行后續(xù)的細胞培養(yǎng)實驗。

4）蛋白包被量從10μg/cm²至500μg/cm²（cm²為培養(yǎng)底面積），最佳的包被量需要根據(jù)研究者的經(jīng)驗或者研究者的個性化需求進行優(yōu)化摸索。

3、厚層凝膠法（1.0 mm，主要用于3D細胞、類器官培養(yǎng)）

1）使用預冷的槍頭或移液管，輕柔的吸取基質(zhì)膠混合至均勻（當基質(zhì)膠堵塞槍頭或移液管時請更換槍頭或移液管），如基質(zhì)膠有較多氣泡，可300g ，4℃離心15s加以去除；

2）將培養(yǎng)板放置冰上，使用預冷的槍頭往預冷的細胞懸液中加入基質(zhì)膠（基質(zhì)膠比例為70%-100%），輕柔的混合充分。

3）按200-300μl/cm² （cm²為培養(yǎng)底面積）向培養(yǎng)孔內(nèi)添加含細胞的基質(zhì)膠；

4）將培養(yǎng)板放置在37℃培養(yǎng)箱30-60min成膠；

5）成膠后，加入新鮮培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

建議步驟：加入培養(yǎng)基清洗未凝固的基質(zhì)膠蛋白，37℃培養(yǎng)箱孵育10min，換成新鮮培養(yǎng)基，以達到優(yōu)異效果。

4、拱形成膠法（主要用于3D細胞、類器官培養(yǎng)）

1）使用預冷的槍頭或移液管，輕柔的吸取基質(zhì)膠混合至均勻（當基質(zhì)膠堵塞槍頭或移液管時請更換槍頭或移液管），如基質(zhì)膠有較多氣泡，可300g ,4℃離心15s加以去除；

2）將基質(zhì)膠加入到預冷的細胞/組織、類器官懸液中（基質(zhì)膠體外成膠最佳濃度為5-8mg/ml，基質(zhì)膠比例為70%-100%），輕輕混勻；

3）用預冷槍頭吸取基質(zhì)膠懸液，緩慢滴加到37℃預熱的培養(yǎng)孔內(nèi)；

4）室溫放置1-2min，轉(zhuǎn)移至37^oC培養(yǎng)箱內(nèi)，在培養(yǎng)箱內(nèi)快速翻轉(zhuǎn)倒置培養(yǎng)板（使培養(yǎng)板蓋子處于底面，力度需自己掌握，以形成水滴狀拱形為標準），孵育30-60min成膠；

5）加入特定類器官培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

5、PDX模型建立

豬來源的基質(zhì)膠，由于蛋白物種間相對保守，具有較低的免疫原性；加之PDX小鼠通常為免疫缺陷小鼠，基質(zhì)膠來源的物種差異對建立PDX模型無影響。我司經(jīng)過大量測試，豬來源的基質(zhì)膠可用于各類腫瘤的體內(nèi)成瘤，效果與進口品牌無差異。

1）使用預冷的槍頭或移液管，輕柔的吸取基質(zhì)膠混合至均勻（當基質(zhì)膠堵塞槍頭或移液管時請更換槍頭或移液管），如基質(zhì)膠有較多氣泡，可300g ,4℃離心15s加以去除；

2）將基質(zhì)膠加入到預冷的腫瘤細胞、腫瘤類器官或者腫瘤組織塊中，輕輕混勻；本產(chǎn)品在小鼠體內(nèi)能快速成膠，最低測試的成膠濃度為3mg/ml，成膠時間約為10min；基質(zhì)膠蛋白濃度越高，凝膠時間越短，膠體剛性越大。

3）用預冷長細槍頭或者針頭吸取基質(zhì)膠懸液，迅速移植到麻醉條件下的小鼠皮下等部位，避免膠體流出；可用廢鼠練習注射過程，并確認基質(zhì)膠是否成膠、成膠時間。

IV 消化傳代與凍存

當類器官需要進行傳代時，可使用我司配套的類器官回收液（LV-ORS001/2）對基質(zhì)膠中的類器官進行回收；

1）解凍消化液，解凍的消化液可短暫存放4℃冰箱中1周或重新凍回-20℃冰箱（反復凍融次數(shù)≤3次），建議在啟用新的消化液時根據(jù)使用情況進行分裝，避免多次反復凍融，4℃保存超過1個月或者多次反復凍融，可能會影響消化效果；

2）去掉舊培養(yǎng)基，用PBS輕輕清洗1-2次，按每50μl基質(zhì)膠對應回收液200-500μl的量加入37℃預熱的回收液，吸取適量的回收液對準膠體頂部吹打，進一步利用槍頭按照“米”字型破壞基質(zhì)膠，使基質(zhì)膠破碎為小塊，混懸于回收液中，將混懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管，放置37℃水浴消化20-30min，期間可輕輕晃動離心管，加速消化過程，離心管靜置后無明顯膠塊漂浮且沉淀聚集于底部時即表明消化完成。可在此時用槍頭吹打沉淀，進一步破碎類器官。

3）向上述15ml離心管內(nèi)添加2-3倍體積培養(yǎng)基進行終止消化，200-300g（研究者可根據(jù)自身要求加以調(diào)整）低溫離心2-5min，即得到類器官沉淀；

4）細胞傳代參照上述III中步驟進行；

5）細胞凍存可利用我司的類器官凍存液（LV-OCS001/2）與小型程序降溫儀（LV-SCryo001/2），以提升凍存效果。

V 產(chǎn)品貨號及推薦

類型、名稱、貨號與推薦用途如下表：

收到貨后，請分裝再使用。

VI關(guān)于售后

如您發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品有任何質(zhì)量問題，請您收集原始數(shù)據(jù)，并第一時間聯(lián)系公司銷售或者技術(shù)支持，公司安排人員保證售后。在獲得客戶的投訴或者建議后，我司承諾24小時內(nèi)做出反應，72小時給出處理結(jié)果，為客戶分析原因并協(xié)助解決技術(shù)問題；確因產(chǎn)品質(zhì)量問題，我司承諾可退、換貨乃至退款。

每個實驗室條件不同，操作人員習慣不同，熟練程度不一樣，實驗失敗存在客觀因素。如未嚴格按照說明書操作、超過售后時限、無法提供原始數(shù)據(jù)等，公司無法進行售后，請老師理解與支持。

公司電話：0755-28284050

技術(shù)支持：19902901483（周博士）