I 簡介

基質膠是一種來源于健康豬細胞外基質，經過洗脫、粉碎、消化等步驟制成的透明膠體。豬在遺傳距離上相比嚙齒類，與人更接近，且豬來源的材料在臨床移植、醫藥、醫美、藥輔材料上有大量的應用例子，Pubmed上目前已有上百篇文獻發表，說明豬來源的基質膠具有天然的可替代性與臨床轉化潛力。本品主要成分是層粘連蛋白、IV型膠原蛋白、巢蛋白和硫酸乙酰肝素蛋白多糖等成分[1，2]，不同組織或者器官來源的基質膠在成分上存在較大差異。本產品具有低內毒素、低DNA含量的優勢，主要用于細胞生長和分化、細胞黏附、類器官擴增、類器官成熟分化和體內成瘤實驗[2]等。

文章引用

Pig-derived ECM-SIS provides a novel matrix gel for tumor modeling. IF 1.6 Q3 RADIOLOGY, NUCLEAR MEDICINE & MEDICAL IMAGING Biomedical Physics & Engineering Express Pub Date : 2024-09-04 DOI:10.1088/2057-1976/ad72fa Yanhua Wu, Hao Wang, Changbo Qu, Xuesong Deng, Na Li, Sile Yue, Wenjing Xu, Yinghua Chen, Ming Zhou

II  試劑與材料

? 無血清培養基

? 渦旋振蕩器

? 冷凍離心機

? 預冷離心管

? TC處理培養板（更利于基質膠貼附）

? 移液管

? 預冷槍頭

? 移液槍

? 生物安全柜

? 37^oC/5% CO₂培養箱

III 使用方法

2 注意：

為確保實驗人員安全及生物安全，請在接觸本產品及其廢棄物時佩戴防護口罩、乳膠手套以及防護眼罩（復蘇時）等必要的防護用品，嚴格按照本說明書操作，實驗結束后所產生的廢棄物按照國家、省、市級相關法律法規，進行無害化處理，確保生物安全。

2 解凍：

將本產品（基質膠）小瓶從-20℃冰箱轉移到冰水混合物內解凍30-120min或 4℃ 冰箱過夜解凍（蛋白濃度高時可能需要更多時間），待液化后用渦旋振蕩小瓶以確保基質膠分散均勻。如一次用不完，可冰上分裝一次，分裝后建議反復凍融不超過3次。如基質膠有較多氣泡，可300g ,4℃離心15s，以去除氣泡。將基質膠放置在無菌區域，冰上待用（保證基質膠溫度不超過8℃）。

2 成膠：

1、薄層凝膠法（膠厚度0.5 mm，低生長因子，8-10mg/ml）

1）使用預冷的槍頭或移液管，輕柔的吸取基質膠混合至均勻（當基質膠堵塞槍頭或移液管時請更換槍頭或移液管）；如基質膠有較多氣泡，可300g ,4℃離心15s加以去除；

2）將培養板放置冰上，按100 μl基質膠/cm²的用量，向培養板中添加基質膠，將培養板在冰上輕柔振蕩，確保膠體均勻涂布于培養孔底部；

3）將培養板置于37℃培養箱孵育30-60min，使基質膠完全成膠；

4）請確保移液器的吸頭不要刮擦膠；用無血清培養基輕輕地對培養孔進行清洗，促進膠面水化，并去除未凝固結合的基質蛋白；此時培養板即可使用。

2、薄層包被法（培養板或者Transwell小室，低生長因子，8-10mg/ml）

1）使用預冷的槍頭或移液管，輕柔的吸取基質膠混合至均勻（當基質膠堵塞槍頭或移液管時請更換槍頭或移液管）；如基質膠有較多氣泡，可300g ，4℃離心15s加以去除；

2）根據每批次基質膠質檢報告中基質膠濃度，用預冷的無血清培養基將基質膠稀釋至50μg/ml，按照培養孔的培養基用量等量進行包被（例如24孔板使用量為500μl），置于37℃培養箱中包被30min；

3）包被好的培養板或者Transwell小室，使用前利用無血清培養基于37℃培養箱中水化處理30min，然后進行后續的細胞培養實驗。

4）蛋白包被量從10μg/cm²至500μg/cm²（cm²為培養底面積），最佳的包被量需要根據研究者的經驗或者研究者的個性化需求進行優化摸索。

3、厚層凝膠法（1.0 mm，主要用于3D細胞、類器官培養）

1）使用預冷的槍頭或移液管，輕柔的吸取基質膠混合至均勻（當基質膠堵塞槍頭或移液管時請更換槍頭或移液管），如基質膠有較多氣泡，可300g ，4℃離心15s加以去除；

2）將培養板放置冰上，使用預冷的槍頭往預冷的細胞懸液中加入基質膠（基質膠比例為70%-100%），輕柔的混合充分。

3）按200-300μl/cm² （cm²為培養底面積）向培養孔內添加含細胞的基質膠；

4）將培養板放置在37℃培養箱30-60min成膠；

5）成膠后，加入新鮮培養基，37℃培養箱中培養。

建議步驟：加入培養基清洗未凝固的基質膠蛋白，37℃培養箱孵育10min，換成新鮮培養基，以達到優異效果。

4、拱形成膠法（主要用于3D細胞、類器官培養）

1）使用預冷的槍頭或移液管，輕柔的吸取基質膠混合至均勻（當基質膠堵塞槍頭或移液管時請更換槍頭或移液管），如基質膠有較多氣泡，可300g ,4℃離心15s加以去除；

2）將基質膠加入到預冷的細胞/組織、類器官懸液中（基質膠體外成膠最佳濃度為5-8mg/ml，基質膠比例為70%-100%），輕輕混勻；

3）用預冷槍頭吸取基質膠懸液，緩慢滴加到37℃預熱的培養孔內；

4）室溫放置1-2min，轉移至37^oC培養箱內，在培養箱內快速翻轉倒置培養板（使培養板蓋子處于底面，力度需自己掌握，以形成水滴狀拱形為標準），孵育30-60min成膠；

5）加入特定類器官培養基繼續培養。

5、PDX模型建立

豬來源的基質膠，由于蛋白物種間相對保守，具有較低的免疫原性；加之PDX小鼠通常為免疫缺陷小鼠，基質膠來源的物種差異對建立PDX模型無影響。我司經過大量測試，豬來源的基質膠可用于各類腫瘤的體內成瘤，效果與進口品牌無差異。

1）使用預冷的槍頭或移液管，輕柔的吸取基質膠混合至均勻（當基質膠堵塞槍頭或移液管時請更換槍頭或移液管），如基質膠有較多氣泡，可300g ,4℃離心15s加以去除；

2）將基質膠加入到預冷的腫瘤細胞、腫瘤類器官或者腫瘤組織塊中，輕輕混勻；本產品在小鼠體內能快速成膠，最低測試的成膠濃度為3mg/ml，成膠時間約為10min；基質膠蛋白濃度越高，凝膠時間越短，膠體剛性越大。

3）用預冷長細槍頭或者針頭吸取基質膠懸液，迅速移植到麻醉條件下的小鼠皮下等部位，避免膠體流出；可用廢鼠練習注射過程，并確認基質膠是否成膠、成膠時間。

IV 消化傳代與凍存

當類器官需要進行傳代時，可使用我司配套的類器官回收液（LV-ORS001/2）對基質膠中的類器官進行回收；

1）解凍消化液，解凍的消化液可短暫存放4℃冰箱中1周或重新凍回-20℃冰箱（反復凍融次數≤3次），建議在啟用新的消化液時根據使用情況進行分裝，避免多次反復凍融，4℃保存超過1個月或者多次反復凍融，可能會影響消化效果；

2）去掉舊培養基，用PBS輕輕清洗1-2次，按每50μl基質膠對應回收液200-500μl的量加入37℃預熱的回收液，吸取適量的回收液對準膠體頂部吹打，進一步利用槍頭按照“米”字型破壞基質膠，使基質膠破碎為小塊，混懸于回收液中，將混懸液轉移至15ml離心管，放置37℃水浴消化20-30min，期間可輕輕晃動離心管，加速消化過程，離心管靜置后無明顯膠塊漂浮且沉淀聚集于底部時即表明消化完成。可在此時用槍頭吹打沉淀，進一步破碎類器官。

3）向上述15ml離心管內添加2-3倍體積培養基進行終止消化，200-300g（研究者可根據自身要求加以調整）低溫離心2-5min，即得到類器官沉淀；

4）細胞傳代參照上述III中步驟進行；

5）細胞凍存可利用我司的類器官凍存液（LV-OCS001/2）與小型程序降溫儀（LV-SCryo001/2），以提升凍存效果。

V 產品貨號及推薦

類型、名稱、貨號與推薦用途如下表：

收到貨后，請分裝再使用。

VI關于售后

如您發現產品有任何質量問題，請您收集原始數據，并第一時間聯系公司銷售或者技術支持，公司安排人員保證售后。在獲得客戶的投訴或者建議后，我司承諾24小時內做出反應，72小時給出處理結果，為客戶分析原因并協助解決技術問題；確因產品質量問題，我司承諾可退、換貨乃至退款。

每個實驗室條件不同，操作人員習慣不同，熟練程度不一樣，實驗失敗存在客觀因素。如未嚴格按照說明書操作、超過售后時限、無法提供原始數據等，公司無法進行售后，請老師理解與支持。

公司電話：0755-28284050

技術支持：19902901483（周博士）