I 簡介

活細胞純化培養(yǎng)基（LV-PHIK00104）利用生物相容性優(yōu)異的新型離心介質(zhì)，利用活細胞對介質(zhì)的排除性，可高效去除死細胞、細胞碎片、部分污染物等雜質(zhì)，提高細胞回收效率。同時，本產(chǎn)品具有維持細胞正常滲透壓、修復部分受損細胞和為細胞提供營養(yǎng)需求的優(yōu)點。經(jīng)測試，本產(chǎn)品可用于多種物種（人、猴、豬、兔子、大鼠、小鼠等）的多種原代細胞的活細胞分離與純化過程，例如肝細胞、血管內(nèi)皮細胞、胰島beta等細胞。

II 細胞分離（以肝細胞為例）

1. 兩步膠原酶灌注法灌注肝臟，具體步驟根據(jù)實驗室的實驗條件而定，通常情況灌注液I（含EGTA）灌注10min~30min，37℃預熱的灌注溶液II（含膠原酶）灌注15min~30min。

2.消化終止與細胞分散，利用含血清的培養(yǎng)基終止消化，過70μm細胞篩，得到單細胞懸液。

3.細胞洗液清洗，4℃，50g，離心5min，去上清（此步驟重復兩次）。

4.活力檢測：重懸細胞，取少量細胞懸液，用臺盼藍排除法染色計數(shù)，細胞活力低于70%，或者未達到預期，可進行活細胞純化步驟。

5.細胞懸液離心去上清，4℃，50g，離心5min。為方便后續(xù)純化，低于1*10⁸細胞總數(shù)可用15mL離心管，高于1*108細胞總數(shù)可用50mL離心管。

III 純化步驟

1.將純化培養(yǎng)基加入到含有細胞沉淀的離心管中，寬口槍頭輕輕重懸細胞，純化培養(yǎng)基推薦使用量見下表：

2.沿管壁向離心管小心加入2-5mL肝細胞鋪板培養(yǎng)基（其它常規(guī)培養(yǎng)基亦可），切勿擾動下層，加入后可見明顯分層。

3.離心1次，4℃，800g（升速為9，降速為1），離心10min。

4.取純化培養(yǎng)基與鋪板培養(yǎng)基之間的細胞層，轉(zhuǎn)移到新的離心管中，加入兩倍體積的鋪板培養(yǎng)基（其它常規(guī)培養(yǎng)基亦可），離心1次：50g ，4℃離心5min。

5.去上清，加入鋪板培養(yǎng)基重懸，取少量細胞懸液，用臺盼藍排除法染色計數(shù)；                                                                  6.將肝細胞接種到膠原包被的培養(yǎng)板中，后續(xù)步驟遵循常規(guī)操作。

IV 特殊說明

寬口槍頭：將1mL槍頭尖減掉，再滅菌使用，以降低細胞剪切力。

       VI 關(guān)于售后

如您發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品有任何質(zhì)量問題，請您收集原始數(shù)據(jù)，并第一時間聯(lián)系公司銷售或者技術(shù)支持，公司安排人員保證售后。每個實驗室條件不同，操作人員習慣不同，熟練程度不一樣，實驗失敗存在客觀因素。如未嚴格按照說明書操作、超過售后時限，公司不做售后，請老師理解與支持。

IⅤ 聯(lián)系方式

公司電話：0755-28284050

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