產(chǎn)品名稱(chēng)：I型鼠尾膠原 （能成膠）
貨號(hào)：LV-Collagen003
規(guī)格：10ml，10mg/ml
保存條件：負(fù)20/70 ℃
貨期：1周
運(yùn)輸條件：干冰運(yùn)輸
產(chǎn)品有效期：3年
質(zhì)檢項(xiàng)目：蛋白質(zhì)濃度檢測(cè)、內(nèi)毒素檢測(cè)（鱟試劑）、膠原純度、細(xì)胞貼壁效果、污染物檢測(cè)、膠原成膠檢測(cè)等。
I 簡(jiǎn)介
I型鼠尾膠原是重要的細(xì)胞外基質(zhì)，可促進(jìn)細(xì)胞貼壁、維持細(xì)胞分化狀態(tài)。我們的產(chǎn)品是從SD大鼠尾腱中提取分離，在萬(wàn)級(jí)實(shí)驗(yàn)室中經(jīng)過(guò)多道工序提純獲得的，保持了膠原蛋白的生物活性。經(jīng)測(cè)試，本產(chǎn)品pH調(diào)至中性后可成膠，可用于多種原代細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)，例如肝細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、胰島beta等細(xì)胞。
II 試劑與耗材
—膠原母液（本產(chǎn)品Cat: LV-collagen003）
—超純水
—醋酸母液
—0.22μm濾膜及50mL一次性注射器
—?dú)溲趸c（Sigma； Cat：S5881-500G）
—移液槍及槍頭
—培養(yǎng)板/皿/瓶
—生物安全柜
—37℃/5%CO2培養(yǎng)箱
III 包被步驟
1. 在生物安全柜中 ，將5mL 醋酸母液加入到1L無(wú)菌水中配制成為醋酸工作液。
2. 加入I型鼠尾膠原母液，使終濃度為50μg/mL，即每100 mL醋酸工作液中加入5 mg膠原蛋白（對(duì)應(yīng)膠原母液體積為V=5mg/10mg/mL=0.5mL），4℃保存待用（不超過(guò)3個(gè)月）。
3. 將膠原工作液以大于/等于5μg/cm2的包被量加入到需要包被處理的培養(yǎng)板/皿/瓶中，通常情況下，加入工作液為推薦培養(yǎng)基（見(jiàn)附表）使用體積的60%，如12孔板的培養(yǎng)基推薦使用體積為1 mL，加入0.6 mL膠原工作液即可達(dá)到飽和。
4. 生物安全柜中，常溫孵育1h。延長(zhǎng)包被時(shí)間至3小時(shí)，對(duì)后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)沒(méi)有影響。
5. 將膠原工作液吸出，生物安全柜中自然晾干，封口膜封口，4℃保存不超過(guò)6個(gè)月。
6. 接種細(xì)胞前，膠原包被培養(yǎng)板/皿/瓶需PBS或培養(yǎng)基清洗一次，以去除殘留的醋酸。
IV 成膠步驟
1. 準(zhǔn)備1M NaOH、10×PBS或10×DMEM以及超純水，過(guò)濾除菌后于冰上預(yù)冷。
2. 成膠溶液的各成分添加量與配置方法：
2.1 10×PBS或10×DMEM的添加量為最終體積的1/10mL。
2.2 膠原添加量為：
終體積×膠原終濃度（mg/ml） | =膠原添加量（mL） |
膠原母液濃度（10mg/mL） |
2.3 NaOH添加量為：
膠原添加量×0.015μL=1M NaOH添加量（μL）
2.4 滅菌水的添加量：
終體積-膠原添加體積-NaOH添加體積-10×PBS或10×DMEM體積=超純水添加量（mL）
3. 將10×PBS或10×DMEM和NaOH溶液以及超純水混合均勻至于冰上。
4. 將膠原加入混合液中充分混勻，然后立即使用。
5. 使用時(shí)可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求直接鋪板，放入37℃孵育30min待膠凝固即可使用.
Ⅵ 參考文獻(xiàn)
(1) Linsley, C., Wu, B. & Tawil, B. The effect of fibrinogen, collagen type I, and fibronectin on mesenchymal stem cell growth and differentiation into osteoblasts. Tissue engineering. Part A 19, 1416-1423, doi:10.1089/ten.TEA.2012.0523 (2013).
(2) Sawada, N. et al. Effects of extracellular matrix components on the growth and differentiation of cultured rat hepatocytes. In vitro cellular & developmental biology : journal of the Tissue Culture Association 23, 267-273 (1987).
附表.培養(yǎng)板/皿/瓶參數(shù)與液體加入推薦量
培養(yǎng)板 | 培養(yǎng)面積（cm2） | 高度（帶蓋mm） | 推薦培養(yǎng)液量/ mL |
6W | 9.5 | 23 | 2 |
12W | 3.6 | 23 | 1 |
24W | 1.9 | 23 | 0.5 |
48W | 0.88 | 23 | 0.3 |
96/96U/96V | 0.32 | 16 | 0.1 |
384W | 0.1135 | 16 | 0.033 |
35mm | 8.5 | 12 | 2 |
60mm | 22.9 | 15 | 5 |
100mm | 57.6 | 20 | 10 |
150mm | 150.1 | 25 | 25-30 |
T25 | 25 | 20 | 5 |
T75 | 75 | 35 | 10 |
T175 | 175 | 40 | 30 |
特殊說(shuō)明
1. 本產(chǎn)品為冷藏發(fā)貨，收貨后可能為部分液體或者液體狀態(tài)（確保仍然低溫），屬于正常狀態(tài)。
2. I型鼠尾膠原母液儲(chǔ)存在-20℃。避免多次凍融，建議根據(jù)需求量進(jìn)行分裝后凍存。
3. 本產(chǎn)品為無(wú)菌液體，請(qǐng)放心使用，無(wú)需過(guò)濾。
4. 膠原工作液可重復(fù)利用2-3次，但需避免因多次包被而造成可能的污染，如懷疑存在污染，請(qǐng)立即放棄使用。
5. 成膠時(shí)只需把終溶液調(diào)成中性即可，添加NaOH的量可能會(huì)有誤差，可和水的添加量進(jìn)行調(diào)整。
6. 各成分溶液添加混合順序可互換，但是要保證不可將NaOH加入膠原溶液中，只可以將膠原溶液加到NaOH溶液中，避免出現(xiàn)因NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部凝膠的情況。
Ⅴ 聯(lián)系方式
公司電話(huà)：0755-28284050
技術(shù)支持：19902901483（周博士）
