I 簡介
膠原蛋白是豬皮的主要組成部分，具有獨特的生化性質和生理功能，具有良好的細胞適應性、細胞增殖、促進傷口愈合，促進骨的形成、增強皮膚代謝，可廣泛使用在醫療、美容和細胞培養方面。我們的產品是從豬皮中提取分離，在萬級實驗室中經過多道工序提純獲得的，保持了膠原蛋白的生物活性。經測試，本產品pH調至中性后可成膠，可用于多種原代細胞的細胞培養，例如肝細胞、血管內皮細胞、間充質干細胞、胰島beta等細胞。
II 試劑與耗材
—膠原母液（本產品Cat: LV-collagen004）
—超純水
—醋酸母液
—0.22μm濾膜及50mL一次性注射器
—氫氧化鈉（Sigma； Cat：S5881-500G）
—移液槍及槍頭
—培養板/皿/瓶
—生物安全柜
—37℃/5%CO2培養箱
III 包被步驟
1.在生物安全柜中，將5mL醋酸母液加入到1L無菌水中配制成為醋酸工作液。
2.加入I型豬皮膠原母液，使終濃度為50μg/mL，即每100mL醋酸工作液中加入5mg膠原蛋白（對應膠原母液體積為V=5mg/10mg/mL=0.5mL），4℃保存待用（不超過3個月）。
3.將膠原工作液以大于/等于5μg/cm2的包被量加入到需要包被處理的培養板/皿/瓶中，通常情況下，加入工作液為推薦培養基（見附表）使用體積的60%，如12孔板的培養基推薦使用體積為1mL，加入0.6mL膠原工作液即可達到飽和。
4.生物安全柜中，常溫孵育1h。延長包被時間至3小時，對后續細胞培養沒有影響。
5.將膠原工作液吸出，生物安全柜中自然晾干，封口膜封口，4℃保存不超過6個月。
6.接種細胞前，膠原包被培養板/皿/瓶需PBS或培養基清洗一次，以去除殘留的醋酸。
IV 成膠步驟
1.準備1M NaOH、10×PBS或10×DMEM以及超純水，過濾除菌后于冰上預冷。
2.成膠溶液的各成分添加量與配置方法：
2.1 10×PBS或10×DMEM的添加量為最終體積的1/10mL。
2.2 膠原添加量為：
終體積×膠原終濃度（mg/ml） |
=膠原添加量（mL） |
膠原母液濃度（10mg/mL） |
2.3 NaOH添加量為：
膠原添加量×0.015μL=1M NaOH添加量（μL）
2.4 滅菌水的添加量：
終體積-膠原添加體積-NaOH添加體積-10×PBS或10×DMEM體積=超純水添加量（mL）
3.將10×PBS或10×DMEM和NaOH溶液以及超純水混合均勻至于冰上。
4.將膠原加入混合液中充分混勻，然后立即使用。
5.使用時可根據實驗需求直接鋪板，放入37℃孵育30min待膠凝固即可使用。
Ⅵ 參考文獻
(1) Biofunctionalization of porcine-derived collagen matrices with platelet rich fibrin: influence on angiogenesis in vitro and in vivo[J]. Clinical Oral Investigations:1-12.
特殊說明
1.本產品為冷藏發貨，收貨后可能為部分液體或者液體狀態（確保仍然低溫），屬于正常狀態。
2.I型豬皮膠原母液儲存在-20℃，避免多次凍融，建議根據需求量進行分裝后凍存。
3.本產品為無菌液體，請放心使用，無需過濾。
4.膠原工作液可重復利用2-3次，但需避免因多次包被而造成可能的污染，如懷疑存在污染，請立即放棄使用。
5.成膠時只需把終溶液調成中性即可，添加NaOH的量可能會有誤差，可和水的添加量進行調整。
6.各成分溶液添加混合順序可互換，但是要保證不可將NaOH加入膠原溶液中，只可以將膠原溶液加到NaOH溶液中，避免出現因NaOH不能迅速混勻而產生局部凝膠的情況。
特殊說明
1. 本產品為冷藏發貨，收貨后可能為部分液體或者液體狀態（確保仍然低溫），屬于正常狀態。
2. I型豬皮膠原母液儲存在-20℃，避免多次凍融，建議根據需求量進行分裝后凍存。
3. 本產品為無菌液體，請放心使用，無需過濾。
4. 膠原工作液可重復利用2-3次，但需避免因多次包被而造成可能的污染，如懷疑存在污染，請立即放棄使用。
5. 成膠時只需把終溶液調成中性即可，添加NaOH的量可能會有誤差，可和水的添加量進行調整。
6. 各成分溶液添加混合順序可互換，但是要保證不可將NaOH加入膠原溶液中，只可以將膠原溶液加到NaOH溶液中，避免出現因NaOH不能迅速混勻而產生局部凝膠的情況。
Ⅴ 聯系方式
公司電話：0755-28284050
技術支持：19902901483（周博士）
