運輸方式

液氮運輸

1、吸附式液氮運輸，無游離液氮，冒白煙即說明正常。

2、溫度監(jiān)測設(shè)備嚴密監(jiān)控運輸過程中的罐內(nèi)溫度，如發(fā)現(xiàn)異常可拷貝溫度記錄儀上的PDF和excel數(shù)據(jù)（溫度監(jiān)測設(shè)備一頭可拔掉，顯示USB接頭，插入電腦即可拷貝數(shù)據(jù)，如遇到困難，可聯(lián)系銷售人員和技術(shù)支持解決）。

3、合金密碼鎖，保證從發(fā)出到收貨，沒有第三方可以打開液氮罐接觸細胞，保護細胞安全。

4、GPS定位器，細胞運輸軌跡全程掌握，防止丟件。

5、液氮罐、溫度監(jiān)測設(shè)備、合金密碼鎖、GPS定位器為回收部件，請妥善保管，禁止破壞，否則會被拉入黑名單。

文章引用

略

適用范圍

人肝竇內(nèi)皮細胞（LSECs）作為肝臟中重要的非實質(zhì)細胞，其獨特的結(jié)構(gòu)和功能使其成為多個科研領(lǐng)域的關(guān)鍵研究對象。以下是其主要的科研用途總結(jié)：

1. 肝臟疾病機制研究

LSECs在多種肝臟病理過程中發(fā)揮核心作用，是研究肝纖維化、脂肪肝、肝癌及肝再生的重要模型：

肝纖維化與肝硬化：LSECs失窗孔（毛細血管化）是肝纖維化的早期事件，通過激活肝星形細胞（HSCs）分泌膠原蛋白，驅(qū)動纖維化進程。

脂肪肝疾病：LSECs通過脂質(zhì)代謝調(diào)控（如STAT3通路）和抗炎作用，影響非酒精性脂肪肝（NAFLD）和酒精性脂肪肝（AFL）的發(fā)展。

肝細胞癌（HCC）：LSECs分泌促血管生成因子（如VEGF），參與腫瘤微環(huán)境重塑及轉(zhuǎn)移調(diào)控，其標志蛋白（如PLVAP）的異常表達與HCC預后相關(guān)。

肝再生：LSECs與肝細胞協(xié)同分泌生長因子（如HGF），促進損傷后的組織修復和功能恢復。

2. 免疫調(diào)控與耐受機制研究

LSECs在肝臟免疫微環(huán)境中具有雙重角色，是研究免疫耐受與炎癥平衡的關(guān)鍵靶點：

免疫耐受誘導：通過表達清道夫受體（如SR-H）和模式識別受體，LSECs清除病原體并抑制T細胞活化，維持肝臟的免疫耐受狀態(tài)，但也可能導致病毒持續(xù)感染或腫瘤免疫逃逸。

炎癥調(diào)控：LSECs分泌抗炎因子（如前列腺素、一氧化氮），抑制過度炎癥反應(yīng)，同時通過內(nèi)吞功能清除血液中的內(nèi)毒素和炎性介質(zhì)。

腸-肝免疫軸協(xié)調(diào)：LSECs通過調(diào)控免疫細胞遷移（如巨噬細胞、T細胞），在腸道來源的抗原處理中起橋梁作用，影響炎性肝病的進展。

3. 藥物代謝與納米醫(yī)學研究

LSECs的高效清道夫功能使其在藥物遞送與毒性評估中具有重要價值：

藥物清除機制：LSECs通過清道夫受體（如Stabilin-1/2）快速清除血液中的大分子（如脂蛋白）和納米顆粒，影響藥物半衰期及療效，是優(yōu)化納米藥物設(shè)計的重要考量。

靶向治療開發(fā)：研究LSECs的清除機制可為減少藥物非特異性攝取提供策略，例如通過修飾納米顆粒表面以避開LSECs的識別。

毒性評估模型：LSECs對藥物或環(huán)境毒素的敏感性（如肝竇毛細血管化）常用于評估肝損傷機制及保護性藥物的篩選。

4. 血管生物學與微循環(huán)研究

LSECs的獨特血管特性為血管生成與微循環(huán)調(diào)控提供了研究平臺：

血管通透性調(diào)控：LSECs的窗孔結(jié)構(gòu)和動態(tài)變化（受Rho-ROCK通路調(diào)控）影響肝竇內(nèi)外物質(zhì)交換，是研究血管通透性機制的理想模型。

凝血與抗凝平衡：LSECs分泌肝素、PGI2等抗凝因子，維持肝竇內(nèi)血流暢通，其功能異常與肝病中的血栓形成相關(guān)。

血管再生研究：LSECs分泌促血管生成因子（如VEGF、Angiopoietin-2），在肝再生或腫瘤血管生成中起關(guān)鍵作用。

5. 生物材料與組織工程應(yīng)用

LSECs的生物學特性在人工肝支持系統(tǒng)和抗凝血材料開發(fā)中具有潛力：

人工肝裝置：LSECs的內(nèi)皮化表面可模擬天然肝竇的代謝和免疫屏障功能，用于構(gòu)建生物反應(yīng)器或器官芯片。

抗凝血材料：LSECs的天然抗凝特性（如分泌PGI2）被用于設(shè)計抗血栓涂層，改善醫(yī)療器械的生物相容性。

總結(jié)

人肝竇內(nèi)皮細胞的科研用途涵蓋肝臟疾病機制、免疫調(diào)控、藥物開發(fā)、血管生物學及生物材料等多個領(lǐng)域，其多功能特性使其成為連接基礎(chǔ)研究與臨床轉(zhuǎn)化的重要橋梁。未來研究可進一步探索LSECs在代謝調(diào)控（如維生素A儲存）和跨器官互作（如腸-肝軸）中的新機制。

由于我司產(chǎn)品說明書半年更新一次，以下步驟僅作參考，以公司隨貨說明書為準

II  試劑與材料

? 肝竇內(nèi)皮細胞（Cat# LV- LESC001/2/3/4）             

? 肝竇內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基（Cat# LV- LSEM001）          

? 膠原包被培養(yǎng)板/皿/瓶（LV-Coated）                                  

? 無菌15ml離心管

? 一次性移液管                                    

? 37℃/5%CO₂培養(yǎng)箱     

? 移液槍                                     

? 恒溫水浴鍋（37℃預熱）

? 冷凍水平離心機（帶水平轉(zhuǎn)子，可離心15ml離心管）        

? 生物安全柜

? 寬口移液槍頭（普通移液槍頭剪去尖頭，再滅菌使用）

? 75%酒精

重要提示：解凍時，凍存細胞轉(zhuǎn)移必須使用液氮轉(zhuǎn)移；在整個復蘇實驗過程中必須全程使用寬口槍頭。

III 細胞的復蘇與鋪板

1. 肝竇內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基放入37℃恒溫水浴鍋中充分預熱。

2.將凍存的肝竇內(nèi)皮細胞從冷藏位置經(jīng)液氮迅速轉(zhuǎn)移至37℃恒溫水浴鍋中，將凍存管盡可能多的浸入

1. 37℃水中，順時針水平搖動，但必須確保凍存管管蓋保持在水面以上。

2. 解凍凍存管約90~120s，至凍存管中只有少量碎冰漂浮即可。

3. 用75%酒精消毒凍存管，并將其轉(zhuǎn)移到生物安全柜。

4. 用寬口槍頭將細胞重懸（輕輕吹打2次），并轉(zhuǎn)移至含10ml預熱培養(yǎng)基的15ml離心管中（注意：凍存管與槍頭上殘留細胞，可用1ml復蘇培養(yǎng)基潤洗凍存管與槍頭）。

5. 將細胞逐滴加入預熱培養(yǎng)基中，最后輕微上下顛倒3次混勻。

6. 600g，4℃離心5min，去上清并用培養(yǎng)基重懸。

7. 沉淀的細胞用肝竇內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基重懸并定容至4ml，用臺盼藍排除法測定細胞的活力和細胞總量。

8. 將細胞按3×10⁴cells/cm²接種至膠原包被培養(yǎng)板中。搖勻，在37℃/5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后換液。

IV 細胞培養(yǎng)與傳代

1. 細胞融合度達到80%時可進行傳代。

2. 提前將培養(yǎng)基、PBS、胰酶放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)。

3. 吸除舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使加入的胰酶能蓋住細胞，37℃孵育，約2~3min后顯微鏡下觀察。

4. 待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞板，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液（控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡）。

5. 600g，室溫離心5min，去上清并用肝竇內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基重懸。

6. 將細胞懸液按3×10⁴cells/cm²接種到新的膠原包被培養(yǎng)瓶/板內(nèi)，置37℃/5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。

細胞復蘇后不可再凍存

V 關(guān)于售后

如您發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品有任何質(zhì)量問題，請您收集原始數(shù)據(jù)，并第一時間聯(lián)系公司銷售或者技術(shù)支持，公司安排人員保證售后。每個實驗室條件不同，操作人員習慣不同，熟練程度不一樣，實驗失敗存在客觀因素。如未嚴格按照說明書操作、超過售后時限，公司不做售后，請老師理解與支持。

售后有效期與提供的原始數(shù)據(jù)：

復蘇問題：立刻報告異常；提供臺盼藍染色或者AO/PI染色。

污染問題：復蘇96小時以內(nèi)；提供相差顯微鏡照片。

純度問題：一個月內(nèi)；提供免疫熒光或者流式結(jié)果。

VI 聯(lián)系電話

公司電話：0755-28284050

技術(shù)支持：19902901483（周博士）